菌種的保存真空冷凍干燥法

1準備用于真空冷凍菌種保藏的安培管宜采用中性玻璃制造，先用2%鹽酸浸泡8~10h,再經自來水沖洗多次,用蒸餾水涮洗2~3次,烘干;在每管內放入打好菌號及日期的標簽,字面朝向管壁,管口塞好脫脂棉塞,121℃下高壓滅菌20分鐘備用。

2準備菌種用真空冷凍干燥法保藏的菌種用菌種純度要高,而且菌齡要適宜。一般細菌的菌齡要求24~48h;酵母菌為3d;形成孢子的微生物則宜保藏孢子;放線菌和絲狀真菌菌齡為7~10d。

3保護劑的選擇和準備選取新鮮牛奶作為保護劑,牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,115℃下高壓蒸汽滅菌25min,備用。

4菌種準備及分裝菌種要求為生長良好的純種,菌齡以處于穩定期為好,孢子是新鮮的。每支長好的斜面加2~3ml保護劑,用接種環將菌苔輕輕刮起。如用液體培養的菌種,則需經離心收集和用滅菌生理鹽水洗滌細胞,收集的菌體用保護劑懸浮制成菌懸液。

5 預凍-80℃冰箱預凍1~2小時。

6冷凍干燥將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內,開始冷凍干燥,時間一般為8-20小時。

7封口抽真空干燥后,取出安培瓶,接在封口用的玻璃管上,可用L形五通管繼續抽氣,約10min即可達到26.7Pa(0.2mmHg。于真空狀態下,以煤氣噴燈的細火焰在安培管頸中央進行封口。

8保藏安瓿管保藏在-20℃冰箱里。